Modèle de lettre de réintégration après détachement

Les réponses cellulaires de la glie de Müller à la RD ont été évaluées. À l`instar des résultats obtenus dans les modèles de mammifères, l`expression du filament intermédiaire GFAP a augmenté dans les régions de détachement (figure 4) dès 3 jours après le détachement. L`expression de la transitine, homologue aviaire du Nestin des mammifères, a été augmentée de la même façon (Fig. 4D). Les processus gliaux positifs pour le marqueur gliales GFAP, transitin et Müller TOPAP (marqueur topographique exprimé le long de l`axe antérieur-postérieur, détecté par l`anticorps 2M6) [44] ont été observés s`étendant au-delà de la membrane limitante externe (OLM) dans les zones de RD dès le jour 3 (Fig. 2, 4). Les zones compatibles avec la cicatrice sous-rétinienne ont été visualisées au jour 7 et 14 avec de larges grappes de processus gliales subrétinien, ainsi que des corps cellulaires positifs pour Sox2 et TOPAP (Fig. 4). Les processus qui peuvent contribuer à l`attachement de la rétine incluent la pompe de RPE, le gonflement osmotique du gel vitreux (équilibré contre le liquide sous-rétinien moins actif osmotiquement), et le débit de fluide qui est dirigé hors de l`espace subrétinien. Les processus qui peuvent contribuer au détachement rétinien incluent la traction sur la rétine et le débit de fluide qui est dirigé dans l`espace sous-rétinien. Des Photomicrographes ont été obtenus à l`aide d`un microscope fluorescent Leica DM5000B et d`un appareil photo numérique Leica DC500. Des images confocales ont été obtenues à l`aide d`un Zeiss LSM 510 à l`installation d`imagerie de Hunt-Curtis.

L`analyse d`image a été décrite précédemment [34]. Les images ont été optimisées pour la couleur, la luminosité et le contraste, et des images à double étiquette superposées à l`aide d`Adobe PhotoshopTM 6,0. Les dénombrements cellulaires ont été faits à partir d`au moins trois animaux différents dans la zone du détachement maximal, et les moyennes et les écarts types calculés sur les ensembles de données. Pour minimiser la variabilité des différences spécifiques à la région dans la rétine, le dénombrement des cellules a été effectué à partir de la même région de la rétine pour les zones de contrôle et de décollement rétinien. L`immunofluorescence a été quantifiée en utilisant image-Pro 6,2. Des réglages d`illumination, de microscope et de caméra identiques ont été utilisés pour obtenir des images à quantifier. Les zones fixes ont été échantillonnées à partir d`images numériques 5,4 mégapixels. Ces zones ont été échantillonnées aléatoirement dans toutes les couches rétiniennes dans des zones de décollement ou de zones de rétine de contrôle similaires. Pour la coloration CD45, la rétine a été choisie comme région d`intérêt du champ de vision 20X mesurant 376 441 μm2. La superficie totale de l`immunofluorescence CD45 rétinienne a été calculée pour les régions avec des intensités de pixels supérieures à un seuil déterminé et moyennée par groupe. La densité moyenne a été calculée comme la valeur moyenne de pixel au-dessus du seuil dans les régions désignées par le seuil.

La somme de densité a été calculée comme le total des valeurs de pixel pour tous les pixels dans les régions désignées par un seuil. Pour les mesures TUNEL, le nombre de cellules immunofluorescentes au-dessus du seuil a été déterminé pour les régions avec des intensités de pixels supérieures à un seuil déterminé à l`aide de l`image-Pro 6,2.